Биотестирование отходов

РД 64-085-89

РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МЕТОДИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ БИОТЕСТИРОВАНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ОПАСНОСТИ ОТХОДОВ, ПОСТУПАЮЩИХ В ОКРУЖАЮЩУЮ СРЕДУ

Дата введения 1990-06-01

УТВЕРЖДАЮ
Заместитель Министра медицинской промышленности СССР В.А.Амбросов
«24» 04 1990 г.
Указанием Министерства медицинской промышленности СССР от 24.04.90 N 61-02-6/854 срок введения установлен с 1 июня 1990 г.
Введены впервые
Настоящие методические указания устанавливают методические основы биотестирования отходов производства и сточных вод, попадающих в окружающую среду и представляющих экологическую опасность. Многие из токсикантов, содержащиеся в сточных водах и отходах производства, обладают токсическим и мутагенным эффектом, что представляет генетическую опасность для человека. В связи с этим в методических указаниях, кроме определения безвредности отходов, представлены методические основы определения мутагенности изучаемых токсикантов.
Результаты работы по изучению токсичности и мутагенности сточных вод и отходов производства, проведенной согласно предложенным методическим указаниям, позволяют разработать рекомендации по обеспечению экологической безопасности.
Настоящие методические указания устанавливают методические основы биотестирования отходов производства и сточных вод на выпуске с целью устранения загрязнения окружающей среды экологически опасными веществами. Многие из токсикантов, содержащиеся в цеховых и общезаводских сточных водах и отходах ММП, обладают токсическим и мутагенным эффектом, что представляет генетическую опасность для человека. В связи с этим в методических указаниях кроме определения безвредности отходов представлены методические основы определения мутагенности изучаемых токсикантов.
Методические указания разработаны на основе современных отечественных и зарубежных данных, методов биотестирования, используемых в экологической токсикологии, а также на основе результатов собственных исследований по биотестированию и определению мутагенности сточных вод и отходов производства предприятий Министерства медицинской промышленности.
Результаты работы по изучению токсичности и мутагенности сточных вод на выпуске и отходов производства на различных этапах технологического процесса, проведенной согласно предложенным методическим указаниям, позволяют разработать рекомендации для предприятий ММП по необходимости захоронения, степени разбавления стоков, или вторичной утилизации отходов с целью соблюдения санитарных требований к водоотведению и обеспечения экологической безопасности.
Настоящие методические указания предназначены для научно-исследовательских и центральных заводских лабораторий предприятий медицинской промышленности, а также для органов контроля экологического состояния воды открытых водоемов и станции водоочистки предприятий и городов.
Методики биотестирования следует использовать при проведении исследовательских работ, предшествующих проектированию природоохранных объектов при возможности попадания в питьевую воду, а также при апробации новых технологий.

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

Усиление антропогенного воздействия на природу, в том числе на водоемы, в которые поступает большое количество различных химических соединений, изменяет среду обитания гидробионтов, ухудшает качество воды, снижает продуктивность промысловых объектов. Даже после биологических очистных сооружений сточные воды, сбрасываемые в водоемы, содержат токсиканты, которые могут нанести значительный ущерб здоровью человека.
Осуществление надежного контроля с использованием только химических методов исследования на предприятиях ММП практически невозможно, так как в большинстве случаев стоки производств и их жидкие отходы являются многокомпонентными и переменными по составу. Существующие методики выявления компонентов мало чувствительны, а для некоторых веществ отсутствуют. Кроме того, присутствие одних соединений мешает определению других, и проведение химических анализов требует значительного времени и не дает истинного представления о токсичности сточных вод в целом. Загрязняющие вещества в воде могут подвергаться трансформации, превращаясь в менее или более токсичные.
В связи с этим в нашей стране и за рубежом все большее значение приобретает применение методов биотестирования на группе гидробионтов — постоянных обитателей природных водных биоценозов.
Метод биологических тестов — эксперимент, в котором используют чистую культуру какого-либо из гидробионтов и изучают его реакцию на добавление токсиканта по изменению характерного, точно измеряемого показателя, который интегрально отражает вредное воздействие вещества. Чувствительность этих методов, по данным литературы, близка к чувствительности метода газо-жидкостной хроматографии. По разведению, при котором не проявляется токсического действия вещества на тест-объект, оказавшийся самым чувствительным, судят о степени опасности сточных вод.
Использование биотестов позволит предотвратить поступление сточных вод и отходов, содержащих токсиканты, выделить наиболее токсичные категории стоков, требующие локального обезвреживания.
В связи с тем, что методы биотестирования должны применяться для контроля токсичности различных категорий сточных вод, в качестве тест-объектов могут быть использованы водные организмы различного систематического положения, отличающиеся по уровню токсобности в зависимости от биологии организмов, их морфофункциональной организации.
В качестве тест-объектов в методических указаниях предлагаются фитогидробионты: одноклеточные зеленые водоросли Scenedesmus quadricauda, высшие растения — ряска Lemna minor, зоогидробионты: инфузории Tetrehymena pyriformis, низшие ракообразные — дафнии Daphnia magna, плоские черви — турбеллярии, планария Dugesia lugubris.
Основными критериями токсического действия на гидробионтов являются показатели выживаемости особей, темпа размножения, роста культуры, интенсивности дыхания и фотосинтеза, изменение фототаксиса хлоропластов; (в хронических опытах): выживаемость особей, плодовитость, анализ потомства, рост организмов, поведенческие реакции.
Определение генетической опасности стоков и отходов производства можно проводить с помощью микробиологического теста Эимса или на млекопитающих согласно принятым в методических рекомендациях по проверке мутагенных свойств у новых лекарственных препаратов. Фармакологический комитет, Москва — 1981 г., 55 с.
Для изучения генетической опасности отходов производства предлагается несколько тестов по анализу мутагенности на дрозофиле — Drosophila melanogaster. Эти исследования представляются необходимыми для выработки оптимальной стратегии нормирования сброса сточных вод и отходов и предотвращения попадания веществ опасных для здоровья. Анализ литературных данных и собственные исследования показывают мутагенное действие ряда промышленных и коммунальных стоков. Дрозофила в генетическом отношении прекрасно изученный объект, позволяющий учитывать любые типы генетических изменений, экономичный, простой в лабораторном содержании, имеющий высокую плодовитость, короткий жизненный цикл. Не случайно дрозофилу уже многие десятилетия используют при анализе мутагенности химических веществ и мутагенов окружающей среды. В опытах с химическими мутагенами показано, что дрозофила является чувствительной тест-системой, реагирующей на 10-10 вещества. Существенно отметить, что у дрозофилы, как и у млекопитающих, имеется система метаболической активации химических веществ, отсутствующая у микроорганизмов;
В методических указаниях содержатся принципы и методы обработки личинок и имаго мух сточными водами и возможности выявления и оценка различных мутаций у потомства.
Для предприятий ММП характерны сбросы сточных вод как постоянного состава, так и периодически меняющегося состава (в зависимости от задач выпуска номенклатуры), возможны и залповые сбросы, аварийные ситуации и т.п. в открытые водоемы, канализационную сеть, поступление их на локальные очистные сооружения, накопление в отстойниках, во всех случаях химический состав стоков всегда многокомпонентен, содержит опасные органические и неорганические токсиканты, токсические метаболиты, соли, различные катионы и анионы, образующиеся при распаде загрязняющих веществ, вызывающих эвтрофирование водоемов, взвешенные вещества, эмульгированные жидкости и т.п. Практически отсутствуют ПДК на компоненты стоков предприятий ММП.
В производственных регламентах по всем стадиям технологического процесса, отходам и стокам на выходе даны основные параметры: рН, …..*, сухой остаток, прокаленный остаток, содержание некоторых катионов и анионов.
________________
* Брак оригинала. — Примечание изготовителя базы данных.
Провести детальный химический анализ стоков и отходов в условиях производства в настоящее время не представляется возможным.
Предложенные в методических указаниях методы биотестирования позволяют определить и контролировать степень токсичности цеховых и общезаводских стоков и отходов непосредственно на производстве на различных этапах технологического процесса, регламентировать возможность попадания токсичных стоков в водоемы или в общий коллектор, дать рекомендации по утилизации, оборотному водоснабжению, вторичному использованию изученных отходов и стоков, прогнозировать экологическую опасность в случае попадания стоков в открытые водоемы.
Из предложенных методов биотестирования следует выделить 3 группы методов:

1) основные, кратковременные, дающие предварительную информацию о токсичности, позволяющие принять срочные меры по предотвращению попадания токсичного стока в окружающую среду. Эти методы рекомендуют использовать непосредственно на заводах отрасли с целью контроля стоков на выходе и при апробации новых технологий.

2) Дополнительные методы, позволяющие более глубоко определить параметры токсичности, с целью выдачи рекомендации по использованию стоков и отходов. Данные методы могут попользоваться как на заводах отрасли, так и в лабораторных условиях при участии отраслевой лаборатории — разработчика методических указаний.

3) Специфические методы, позволяющие определить не только токсичность изучаемых стоков, но и действие их на воспроизводящую систему, пролиферацию и генетический аппарат проводятся отраслевой лабораторией разработчика методических указаний.
Комплексный подход в изучении токсичности и мутагенности отходов и стоков производства с применением ряда биотестов представляет собой новые методические основы изучения экологически опасных веществ в окружающей среде.

Суть и задачи биотестирования и биоиндикации

И биоиндикация, и биотестирование активно применяются в сфере контроля за состоянием окружающей среды. Некоторые методы регламентируются нормативными актами в рамках экологического законодательства.

Но в значении этих двух процедур биодиагностики существуют различия. Биотестирование заключается в установлении уровня токсичности среды через специальные тест-объекты. Это простой и точный метод, который получил распространение вместе с методами химанализа. Есть 2 основных типа биотестирования – хемотаксическое и морфофизиологическое. Первый — более точный, позволяет анализировать продукты жизнедеятельности тест-объектов. Второй вид описывает изменения физиологии организмов в загрязненной среде, например, мутаций и врожденных аномалий — тератогенез.

Биоиндикация, в свою очередь, дает оценку среды по численности и составу видов-индикаторов. Пример – мониторинг состояния воздуха конкретной территории с помощью анализа биоты лишайников.

В этом направлении работают ученые, публикуя результаты в научных изданиях – «Гидрометеоиздат», «Молодой ученный» и др. Более масштабные исследования описываются в монографиях, диссертациях.

БИОТЕСТИРОВАНИЕ НА ФИТОГИДРОБИОНТАХ

1.1.1. Требования к объекту
Водоросль широко распространена в природных пресных водах, входит в состав биоценоза активного ила. Легко культивируется в лабораторных условиях на минеральных средах. Размножается делением клеток, в связи с чем в культуре часто встречаются группы, состоящие из 2-4 особей. Водоросль относится к токсобным организмам, способствует очищению среды от токсикантов.

1.1.2. Сущность метода
Основной метод: степень токсического воздействия изучаемых стоков оценивается по изменению плотности культуры, появлению в ней мертвых клеток в различные интервалы времени воздействия токсикантов. Специфический метод — по изменению интенсивности дыхания с помощью радиоактивной метки (С).

1.1.3. Способ лабораторного содержания (культивирования) водорослей
Культуру поддерживают в колбах вместимостью 500-1000 мл на минеральной среде следующего состава: на 1 л воды: калия азотнокислого — 2 г (ч., ГОСТ 4144-79); калия фосфорнокислого двузамещенного 3-водного — 0,3 г (ч., ГОСТ 2493-75); марганца сернокислого 5-водного — 0,3 г (ч., ГОСТ 435-77). Среду разливают в плоскодонные колбы и добавляют по 5-10 мл культуры водорослей.
Культивирование водорослей проводят в люминостате при освещенности 3-5 тыс. лк не менее 18 ч в сутки при температуре 18-20°С.
Пересев культуры на свежую питательную среду проводят по мере роста культуры не реже 1 раза в месяц.
Для более равномерного роста культуры следует перемешивать и продувать воздухом с помощью аквариумного компрессора.

1.1.4. Отбор проб тестируемой воды, их предварительная обработка и хранение
Пробы сточных вод отбирают в соответствии с НВН 33-5.3.01-85.
Объем пробы для определения токсического действия — 1 л.
Удаление взвешенных частиц из проб производят не позднее, чем через 2 ч после отбора. Для этого пробы фильтруют через фильтровальную бумагу. Отфильтрованные пробы хранят при температуре не выше 0°С в течение 30 сут, при температуре не выше +10°С не более 4 сут.
Консервированию пробы воды для биотестирования не подлежат.
Измерение рН пробы воды и ее корректировку проводят перед постановкой эксперимента.
Вода для контроля и приготовления разбавлений должна удовлетворять требованиям, изложенным в ИСО 6341-82* и должна обеспечивать выживаемость 100% биообъектов за период не менее 96.
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. — Примечание изготовителя базы данных.
Содержание кислорода (O) в воде контролируют оксиметром КЛ-115 по ТУ 25.2705-80*.
________________
* ТУ, упомянутые здесь и далее по тексту, в информационных продуктах не содержатся. За информацией о документе Вы можете обратиться в Службу поддержки пользователей. — Примечание изготовителя базы данных.

1.1.5. Подготовка к эксперименту

1.1.5.1. Плотность культуры для биотестирования должна быть не менее 2-3 млн. клеток в 1 мл.
Подсчет клеток водорослей проводят под бинокулярным микроскопом любой марки при увеличении 10х20 в камерах Фукса-Розенталя в 16 квадратах по диагонали в обеих ячейках камеры. Считают отдельно одиночные, двойные и четверные клетки, количество их суммируют и выводят общее число клеток в 1 мл культуры () по двум камерам по формуле:

, (1)

1.1.5.2. Окраска водорослей для проведения подсчета живых и мертвых клеток

1) Приготовление раствора метиленового синего. 200 мг метиленового синего 3-водного индикатора (ч.д.а., ТУ 6-09-29-76) разводят в 1 л фосфатного буфера рН 7,4 в колбе вместимостью 1 л.

2) Приготовление фосфатного буфера рН 7,4. В мерной колбе вместимостью 1 л растворяют в 100 мл воды 18,2 г (точная навеска) калия фосфорнокислого однозамещенного (ч., ГОСТ 4198-75) и 28,1 г (точная навеска) натрия фосфорнокислого двузамещенного (ч.д.а., ГОСТ 11773-76) и доводят объем раствора водой до метки.

3) Приготовление нейтрального красного. 100 мг нейтрального красного индикатора (ч.д.а., ТУ 6-09-4120-75) разводят в 1 л дистиллированной воды в колбе вместимостью 1 л.
Растворы хранят в течение месяца в холодильнике.

1.1.6. Проведение эксперимента
Опыты проводят в колбах или химических стаканах вместимостью 150-250 мл, не менее, чем в 3 параллелях.
Готовят сточные воды или жидкие отходы в различных разведениях 1:0, 1:2, 1:3 и так далее в зависимости от токсичности испытуемых жидкостей. Разведение проводят на среде культивирования водорослей.
Контролем для анализа служит среда культивирования водорослей.
В опытные колбы (химические стаканы) к среде с водорослями добавляют испытуемую жидкость так, чтобы общий объем и плотность культуры водорослей были одинаковыми в контрольных и опытных сериях.
Время эксперимента определяют опытным путем в зависимости от токсичности испытуемых жидкостей от 1 сут до 30 сут.

1.1.7. Анализ результатов
В различные интервалы времени (через 1 сут, 3 сут и так далее) в опытных и контрольных колбах определяют плотность культуры водорослей. Уменьшение или увеличение числа клеток водорослей выражают в процентах от контроля.
Для выявления живых и мертвых клеток к 1 мл культуры водорослей добавляют 1 мл метиленового синего и 0,5 мл нейтрального красного. Метиленовый синий окрашивает мертвые клетки в голубой цвет, нейтральный красный окрашивает живые клетки в розовый цвет, причем метиленовый синий проникает в погибшую клетку легче, чем нейтральный красный в живую, поэтому клетки с голубовато-зеленым цветом обычно просчитывают как мертвые, Число погибших клеток в 1 мл культуры выражают в процентах. Подсчет живых и мертвых клеток проводят через 20 мин после окрашивания. При подсчете плотности культуры и числа живых и мертвых клеток под микроскопом проводят анализ морфологии клеток с описанием изменения их структуры в различные сроки действия токсиканта.

1.1.8. Подготовка эксперимента с радиоактивной меткой
Плотность культуры водорослей, взятой для исследования должна быть 30-50 млн. клеток в 1 мл. Опыт проводят в трех параллелях, контрольные пробы содержат только среду культивирования водорослей.
Меченую глюкозу (С) с активностью 20 МБК добавляют в опытные и контрольные пробы непосредственно перед проведением эксперимента.

1.1.8.1. Приготовление сцитиляционной жидкости

1.1.9. Проведение эксперимента с радиоактивной меткой
Опыт проводят в изотопном блоке с соблюдением мер безопасности при работе с радионуклидами.
Подготовленные к работе пробы (контрольные и опытные колбы с разведенными до определенной концентрации испытуемыми стоками) переносят в изотопный блок и в них добавляют меченую глюкозу из расчета 0,5-1,0 МБК на 50 мл пробы. После внесения метки пробы помещают в темноту (колбы плотно оборачивают темной бумагой, фольгой) для усиления дыхания водорослей и прекращения фотосинтеза на 1…..*, 30, 60 мин. Углекислый газ, выделяющейся при дыхании водорослей, улавливают 10% раствором едкого натра через отводную стеклянную трубку. Через 15, 30, 50 мин 0,5 мл полученного раствора углекислого натрия помещает в виалы с 4,5 мл сцинтилляционной жидкости.
________________
* Брак оригинала. — Примечание изготовителя базы данных.
Примечание: Приготовление 10% натрия гидроокиси. 10,0 г натрия гидроокиси (ч., ГОСТ 4328-77) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и приливают воду до метки.

1.1.10. Анализ результатов
Подсчет импульсов мечения углерода (С) проводят с помощью жидкостного сцинтилляционного спектрометра любой марки, пригодного для обнаружения источников -излучений. Показания спектрометра, полученного для трех параллельных проб, усредняют и соотносят к показаниям контроля (100%). Ингибирование или стимулирование дыхания водорослей выражают в процентах от контроля.
Испытуемая жидкость, ингибирующая дыхание водорослей более, чем на 15% считается токсичной для фитогидробионтов.

1.2.1. Требования к объекту
Ряска широко распространена в природных пресных водоемах. Стебель имеет чечевицеобразную форму, лист сверху светло-зеленый, снизу фиолетовый, гладкий, блестящий. Вниз от стебля отходит один корешок. Листовые пластинки имеют воздушные полости, поддерживающие ряску в плавучем состоянии. Размножение вегетативное, цветет крайне редко.

1.2.2. Сущность метода
Дополнительный метод основывается на изменении под действием токсикантов состояния пигментного комплекса хлоропластов, изменения их фототаксиса (движения хлоропластов по отношению к источнику света). Подсчет хлоропластов с отрицательным фототаксисом проводят под бинокулярным микроскопом при увеличении 10х40.

1.2.3. Способ лабораторного содержания (культивирования) ряски
В лабораторных условиях ряску содержат в аквариумах с природной водой при температуре 18-20°С, освещении 100-200 лк. В аквариумах с ряской могут быть представлены различные виды водорослей, инфузорий, ракообразных, моллюсков, рыб.

1.2.4. Проведение эксперимента
Листья ряски помещают в медицинский шприц вместимостью 10 мл с раствором токсиканта изучаемой концентрации. 10-20 раз перемещают поршень шприца, создают разрежение в шприце. При этом воздух выходит из межклетников листьев и замещается на исследуемый раствор. Признаком успешной инфильтрации служит прозрачность листа ряски. С помощью препаровальной иглы листья извлекают из шприца и помещают в чашки Петри на 17 ч на слабый свет (40 лк) при комнатной температуре. Опытные листья находятся в чашках Петри в растворе токсиканта, контрольные — в воде культивирования ряски. Через 17 ч листья ряски опытные и контрольные помещают на предметное стекло и под микроскопом подсчитывают число хлоропластов, находящихся у верхней стенки клеток в эпистрофном положении (перпендикулярно лучам света, плашмя) — положительный фототаксис. На 10 мин создают максимальное освещение объекта (открывается полевая и аппретурная диафрагма микроскопа). Через 10 мин освещение объекта уменьшают до удобного предела и в тех же клетках подсчитывают количество эпистрофных хлоропластов. При этом часть хлоропластов переходит в результате отрицательного фототаксиса в парастрофное состояние, поворачиваясь ребром по отношению к лучам света.

1.2.5. Анализ результатов
Процент эпистрофных хлоропластов после 10-минутного воздействия сильного света по отношению к исходному уровню служит показателем повреждения клеток токсикантом.
Пример расчета.
В 10 клетках листа ряски после слабого света число хлоропластов в эпистрофном положении:
20; 15; 24; 20; 18; 21; 17; 24; 25; 19, в среднем это составляет 20,3 хлоропласта на клетку.
После 10-минутного освещения сильным светом подсчет эпистрофных хлоропластов в этих же клетках составил:
14; 15; 11; 13; 9; 0; 0; 4; 0; 22, в среднем 8,8 хлоропласта на клетку.
В процентах от прежней величины это составляет 43%, это является показателем интенсивности фототаксиса или степени повреждения клеток.
В контроле получены следующие данные:
после слабого света: 24; 13; 17; 28; 16; 16; 17; 18; 26; 23, в среднем на клетку — 19,8 хлоропласта.
После 10-минутного освещения сильным светом: 4; 6; 0; 0; 0; 0; 0; 0; 0, в среднем на клетку — 1 хлоропласт, что составляет 5% от прежней величины.
Достоверность отличия контрольных показателей и опытных вычисляют по t-критерию Стьюдента.

БИОТЕСТИРОВАНИЕ НА ЗООГИДРОБИОНТАХ

2.1. Биотестирование на ветвистоусых рачках дафниях Daphnia magna*
________________
* далее по тексту — дафнии, рачки

2.1.1. Требования к объекту
Дафнии обитают в стоячих и слабо проточных водоемах с содержанием растворенного кислорода от 2 мг 0/л и более. По способу питания относятся к активным фильтраторам. Самки дафнии достигают в длину 3-5 мм, самцы в 2 раза меньше самок. Тело рачка заключено в прозрачную раковину. Имеет большие антенны, служащие для передвижения, пару глаз. Под раковиной различимы сердце, кишечник, 5 пар грудных ножек, между спинной частью туловища и панцирем расположена выводковая камера, в которой происходит эмбриональное развитие рачков. В природе в летнее время, в лабораторных условиях при нормальном кормлении, температуре, освещении — круглый год дафнии размножаются партеногенетически (без оплодотворения). При этом рождаются только самки.
Максимальная скорость размножения дафний при температуре воды 18-22°С — 10 сут. При этом происходит 3-4 линьки (смены раковины). Время между пометами — 6 сут, количество молоди в помете — от 8 до 40 от одной самки. Длительность эмбрионального развития — 3-4 сут.
Процесс питания дафний непосредственно связан с движением грудных ножек, направляющих ток воды внутрь раковины, где происходит отфильтровывание твердых частиц, скапливающихся в брюшном желобке и направляющихся затем в ротовое отверстие. В связи с этим дафнии в процессе питания пропускают через свое тело объемы воды, многократно превышающие объемы собственного тела, и в их пищеварительном тракте быстро накапливаются значительные концентрации растворенных и взвешенных веществ.

2.1.2. Сущность метода
При биотестировании используют основной метод: кратковременные опыты — 1-2 сут, 5-7 сут; дополнительный метод — суохронический опыт — 14 сут; специфический метод — хронический метод — 21-30 сут. При этом оценивают поведение рачков, их рост, число линек, степень наполнения кишечника, время образования и развития яиц, число пометов, количество народившейся молоди.
Наиболее показателен тест выживаемости рачков, темп размножения, анализ плодовитости и роста потомства. По этим параметрам определяют LT, LC, LC, LC.

2.1.3. Способ лабораторного содержания (культивирования) дафний
Культивирование дафний проводят в аквариумах вместимостью 10-20 л. Чистку аквариумов, смену воды производят по мере появления избытка детрита и посторонних примесей. Воду (кипяченую, дехлорированную) следует подливать в аквариум по мере испарения и уменьшения объема воды, поддерживают постоянное освещение и температуру воды 18-20°С.
Для поддержания культуры дафний в аквариумах следует создать условия природного биоценоза: простейшие, водоросли, высшие растения, моллюски.

1 г свежих или 0,3 г сухих хлебопекарных дрожжей (ГОСТ 171-81) заливают 100 мл дистиллированной воды. После набухания содержимое перемешивают, суспензию отстаивают в течение 30 мин. Надосадочную жидкость добавляют в сосуды с дафниями в количестве 3 мг на 1 л воды.
Дрожжевой корм используют свежеприготовленным.
Подкормку проводят 2-3 раза в неделю.

2.1.4. Подготовка к кратковременному эксперименту (острые, подострые и субхронические опыты)
Отлов дафний из аквариума следует проводить чистой пипеткой вместимостью 10 мл с резиновой грушей на конце и переносить в химические стаканы вместимостью 150-200 мл, заполненные водой из аквариума. Посадка в химические стаканы по 5-6 особей. Отбирают половозрелых самок одного размера с 10-15 яйцами в сумке, для получения генетически однородной культуры дафний используют для опыта 3-5 поколений одной самки. Подкормку отобранных в стаканы самок и появляющейся молоди проводят по п.2.1.3.
Пробы сточных вод отбирают в соответствии с НВН 33-5.3.01-85.
Объем пробы для определения токсического действия — 1 л.
Вода для контроля и приготовления разбавлений должна удовлетворять требованиям, изложенным в ИСО 6341-82 и должна обеспечивать выживаемость 100% дафний за период не менее 96 ч.
Содержание кислорода (O) в воде контролируют оксиметром КЛ-115 по ТУ 25.2705-80. Содержание O в воде должно быть не менее 3 мг/л.
Для приготовления рабочих растворов, разведения токсикантов следует использовать дехлорированную кипяченую воду средней жесткости (2,5-5,3 мг экв/л). Можно использовать природную воду или воду из лабораторного аквариума.
Готовят ряд концентраций или разведений исследуемого токсиканта методом разбавления наибольшей опытной концентрации с определенной кратностью: 2, 5, 10 и т.д.
В опыте используют химические стаканы вместимостью 50 мл, в которые помещают исследуемые жидкости в различных разведениях и не менее трех параллелей на каждую пробу. Общий объем пробы 30 мл. В контрольные химические стаканы помещают по 30 мл воды из лабораторного аквариума.

2.1.5. Метрологические характеристики культуры
Сходимость и воспроизводимость результатов биотестирования на дафниях определяют в модельных опытах на стандартном растворе токсиканта — бихромата калия (KCrO, х.ч.) в диапазоне концентраций 0,05-2,5 мг/л.
Готовят маточный раствор, содержащий 1 г препарата в 1 л дистиллированной воды. 1 мл содержит 1 мг бихромата калия.
Методом разведения готовят растворы, содержащие от 0,5 до 3,0 мг/л бихромата калия.
Средние значения концентраций, вызывающих гибель 50% дафний за 24 ч в эксперименте, должны находиться в интервале 0,9-2,0 мг/л (ИСО 6341-82).
Если чувствительность лабораторной культуры дафний не удовлетворяет этим требованиям, то проводят анализ причин снижения чувствительности дафний, производят соответствующую корректировку условий их культивирования или выращивают культуру из новых исходных маточных популяций.
Проверку культуры по стандартному раствору токсиканта проводят не реже 1 раза в месяц.

2.1.6. Проведение кратковременного эксперимента (острый — 96 ч, подострый — 5-7 сут, субхронический — 14 сут)
Работу следует проводить с молодью дафний однодневного и двухдневного возраста.
В опытные и контрольные стаканы помещают по 5-10 рачков нового поколения, полученных при отсадке самок из аквариума.
В остром опыте рачков не подкармливают.
В первые 5 ч ежечасно, затем 2 раза в день снимают показания, учитывая при этом количество выживших особей, их поведение, степень и характер передвижения, степень наполнения кишечника пищей, количество линек. Результаты записывают в журнал.
При постановке кратковременных экспериментов периодичность обновления испытуемых растворов зависит от стабильности токсикантов в воде.

2.1.7. Анализ результатов кратковременных экспериментов (острый, подострый и субхронический опыт)
Изменение жизнедеятельности дафний в опыте сравнивают с контролем.
По результатам кратковременных опытов определяют:

LT — среднее (медианное) время выживания 50% особей в ряду концентраций;

LC — пороговая концентрация (минимальная недействующая), при которой организмы не гибнут; минимальная величина разведения;

LC — средняя (медианная) летальная концентрация, вызывающая гибель 50% подопытных рачков;

LC — концентрация вещества, при которой гибнут все животные.
Для определения LT данные по выживаемости дафний в различные интервалы времени сводят в таблицу.

Таблица 1

Выживаемость дафний (%) в растворах токсиканта в течение четырех суток

Концентрация C, мг/л (или разведение)

Время, сут

1

2

3

4 и т.д.

0 (контроль)

100

100

100

100

2

100

100

95

91

5

100

95

91

70

10

95

80

75

62

20

75

65

50

40

50

65

40

25

10

100

32

25

10

5

Если гибель рачков происходит в течение 1-2 сут, то изучаемый сток обладает сильной токсичностью.
Если гибель рачков происходит в течение 5-10 сут, то изучаемый сток обладает средней токсичностью, в течение 10-20 сут — слабой токсичностью.

Сколько ждать?

В среднем, весь процесс лабораторного анализа и разработки протокола занимает две недели.

Положительным моментом для природопользователей является то, что протокол биотестирования на конкретный отход оформляется один раз и действует на бессрочной основе. Единственное, при появлении на предприятии нового отхода необходимо заново определять класс опасности и оформлять либо паспорт, либо протокол, подтверждающий V класс.

Заказать консультацию

  1. Главная
  2. Экологические услуги

Цена от: 4500 руб.
за объект

Согласно требованиям действующего законодательства РФ (89-ФЗ «Об отходах производства и потребления») все лица, как юридические, так и физические, занимающиеся любой хозяйственной деятельностью, в результате которой образуются отходы, обязаны провести их классификацию и отнести к соответствующей категории опасности: с первой по пятую.

Разработан Федеральный классификационный каталог отходов, где наиболее распространенные виды утильматериалов уже отнесены к определенному классу, и по этому документу оформляется паспорт отходов. Для пятого класса паспортизация не нужна. Но отнесение к пятому, безопасному виду утилизируемых материалов, необходимо подтвердить проведением процедуры, которая носит название «биотестирование отходов». Суть метода в том, что в водную вытяжку из утильсырья помещают био-объекты (инфузории, рачки дафнии, водоросли), выполняющие роль тестового материала. Отклонения от нормы жизненно важных функций тест-материала является критерием отнесения токсичной среды к определенной категории. Причем показателем для классификации является проявление даже одной из негативных реакций тест-объектов. Сохранение характерной для био-материала жизнедеятельности свидетельствует о безопасности исследуемого материала.

ВАЖНО! На классификацию образовавшихся отходов законодательством отводится 90 дней.

Как проходит процесс тестирования?

Биотестирование отходов 5 класса проводится специалистами в следующем порядке:

  • подготавливается водная вытяжка из отходов на основе дистиллята с добавлением измельченного и прошедшего необходимую фильтрацию материала;
  • в подготовленную смесь вносят определенное количество тест-объектов (два и более биологических вида);
  • по окончании отведенного на тест времени проводится анализ показателей жизнедеятельности био-материала (коэффициент смертности дафний, мутации водорослей).

После исследований оформляется протокол биотестирования.

Кому заказать тестирование отходов?

Согласно действующим нормативным актам тест потребительских отходов и утиль отходов производства проводят исключительно аккредитованные лаборатории по одобренным методикам.

Специалисты нашей компании «Мосэкология» на высоком профессиональном уровне проводят тестирование отходов с соблюдением всех требований законодательства РФ, используя современные методики, высококачественные реактивы и биоматериал.

На биотестирование отходов 5 класса цена нами установлена весьма привлекательная, при этом мы гарантируем качество исследований, соблюдение сроков исполнения задания.

Как мы работаем?

Заполните форму или позвоните нам

Мы оценим работу и свяжемся с Вами

Выполним работу

Вы получаете готовую работу с гарантией

Нужна консультация? — Звоните!

8 (499) 350-27-58

  • 2.9
  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5

Голосов: 63

Вопрос – ответ

Нужны ли инженерно-экологические изыскания

Безусловно нужны. Специалисты нашей компании «Мосэкология» проводят экологические изыскания для подготовки документации по планированию территорий, архитектурного проектирования, строительства и реконструкции сооружений различного назначения. В ходе исследований получают актуальные сведения о состоянии экологии местности, делают оценку возможного воздействия градостроительной деятельности на окружающую среду, участвуют в разработке природоохранных мероприятий, направленных на минимизацию негативных последствий хозяйственной деятельности.

Срок действия экологических изысканий для проектирования

Действующие нормативные документы допускают использование материалов и данных, полученных в результате ранее выполненных изысканий с учетом их репрезентативности, которую определяет табл.8.1. СП 47.13330.2016, которой руководствуются инженеры нашей компании «Мосэкология». Срок действия различен для отдельных компонентов техноприродной среды и установлен:

  • для застроенных территорий от 2 до 5 лет (показатели загрязненности воздуха, воды, показатели радиационной обстановки, состояния флоры и фауны действительны 2 года, данные о состоянии почвы, информация об источниках загрязнения – 3, об опасных природно-антропогенных процессах – 5 лет);
  • для незастроенных территорий от 2 до 10 лет (по воде, воздуху, радиации – 3 года, по источникам загрязнения и почве – 5 лет, по опасным процессам – 10 лет).

Требования к экологическим изысканиям

Инженерно-экологические изыскания проводятся поэтапно. Состав и объем исследований согласно СП 47.13330.2016 должны обеспечить:

  • получение достоверных и достаточных сведений о природных условиях выбранной площадки для строительства, возможных источниках ее загрязнения;
  • составление прогноза взаимодействия окружающей среды и проектируемых зданий и сооружений;
  • принятие решений для разработки природоохранных мероприятий, обеспечивающих безопасную эксплуатацию сооружения.

Использование материалов исследований прошлых лет разрешается с учетом допустимых нормативами сроков давности.

Исполнитель инженерных изысканий обеспечивает внутренний контроль качества полевых, лабораторных и камеральных работ.

Оставить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *